內戰是漫威宇宙中最重要的一次大事件，圍繞在「蘇科維亞協議」（漫畫：超人類註冊法案）的正反爭論上，這是一個規定超人類（超級英雄）們都該向政府登記身份的法案，世界各國政府在奧創事件（電影：《復仇者聯盟2》）後認為復仇者們處理事情的連帶損害太大，以後不該魯莽行動，因而制定此法。支持派（鋼鐵人派）認為英雄們都該受到政府管制，在規範內活動才能降低一般人民的恐懼感，並且能夠有規矩地行事。反對派（美國隊長派）認為英雄已經付出許多拯救社會，不該再被監控且失去個資隱密，這樣違背了他們的人權以及代表美國的自由平等精神。
引發超級英雄內戰的「蘇科維亞協議」
「酷寒戰士」巴奇在與美國隊長對戰之後失蹤，調查失蹤人口的獵鷹成功地尋得他的下落，並發現巴奇過去令人震驚的秘密任務，這個線索讓原先意見已經分歧的復仇者們產生更多裂痕，此時邪惡組織九頭蛇的勢力再度出現，對美國隊長造成威脅，英雄們將在解決歧異時，面臨更大危機。
美國隊長隊伍：獵鷹，蟻人，緋紅女巫，鷹眼，酷寒戰士
美國隊長（史蒂夫羅傑斯）首次登場電影：《美國隊長》克里斯伊凡飾
在軍中接受血清實驗後獲得超乎常人的體能，武器是汎合金盾牌，能夠吸收幾乎所有形式的攻擊，在《復仇者聯盟》電影中，遭到雷神索爾的神鎚攻擊後也毫髮無傷。經常無法接受東尼史塔克的「未雨綢繆」思維，反對鋼鐵人製造奧創軍隊守護地球的想法。在《美國隊長2》之後，因為政府的背叛而對政府失去信任，並認為若英雄受政府掌控，將有可能在受迫情況下做出違反自己意志的事。
獵鷹（山姆威爾森）首次登場電影：《美國隊長2：酷寒戰士》安東尼麥凱飾
曾為優異的戰鬥機飛行員，在《酷寒戰士》事件中與美國隊長並肩作戰，武器是鷹翼狀的飛行器，在《復仇者聯盟2》電影結尾，加入成為新的復仇者聯盟成員，並曾在《蟻人》電影中登場與史考特對決。
蟻人（史考特朗恩）首次登場電影：《蟻人》保羅路德飾
原本是個小偷，繼承科學家皮姆博士的蟻人裝備後，加入了守護世界的行列，能力是任意放大縮小身體，同時獲得改變密度的力量，更可以操縱蟻群協助行動。
緋紅女巫（汪達馬克希莫夫）首次登場電影：《復仇者聯盟2：奧創紀元》伊莉莎白歐森飾
原本是東歐戰爭下的受害者，被九頭蛇機構改造獲得特殊能力，能操縱物體以及魅惑人心，在《復仇者聯盟2》中原先受奧創指使，後來被鷹眼感化而反抗奧創，隨後加入了新復仇者聯盟。
鷹眼（克林特巴頓）首次登場電影：《雷神索爾》傑瑞米雷納飾
神盾局的領導探員，是百發百中的神射手，武器是具有多種功能的高科技箭，是非常具有戰略能力的角色。在《復仇者聯盟2》的奧創大戰結束後，歸鄉隱退，與老婆定居。
酷寒戰士（詹姆斯巴奇巴恩斯）首次登場電影：《美國隊長2：酷寒戰士》賽巴斯汀史坦飾
原先是美國隊長從軍時的好友，在一次任務中墜崖失蹤，被九頭蛇組織救起改造，成為殺人無情的人體兵器，擅長格鬥刀術以及具備超合金的手臂。《美國隊長2：酷寒戰士》電影最後他救起了墜入河中的美國隊長，並從此隱匿蹤跡，曾到美國隊長紀念館看了自己二戰時的資料，試圖恢復記憶。
鋼鐵人隊伍：幻視，戰爭機器，黑寡婦，黑豹，蜘蛛人
鋼鐵人（東尼史塔克）首次登場電影：《鋼鐵人》小勞勃道尼飾
頂尖的軍事科學家，在一次受困於戰區的情況下，製造出機械戰鬥服，不斷精進下成為了鋼鐵人。是復仇者聯盟中的靈魂人物之一，有著善於規劃策略的天才頭腦，但常常在「英雄與世界的關係」議題上與美國隊長立場相左，《復仇者聯盟2》中便曾為了製造奧創軍隊的想法爭論不休。
幻視（賈維斯）首次登場電影：《復仇者聯盟2：奧創紀元》保羅貝特尼飾
原先是鋼鐵人的人工智慧管家系統，在《復仇者聯盟2》中，被鋼鐵人上載到奧創製造的超人類形體，吸收了心靈寶石的力量。電影中曾經出現的能力有激發光束，以及舉起雷神神鎚的超力量。在奧創大戰結束後，加入了新復仇者聯盟。
戰爭機器（詹姆斯羅德）首次登場電影：《鋼鐵人》唐奇多飾
為東尼史塔克在美國軍中的好友，穿上了鋼鐵人為軍隊設計的「戰爭機器」裝甲，與他一同作戰，曾在《鋼鐵人2》中聯手擊敗反派「鞭狂」。
黑寡婦（娜塔莎羅曼諾夫）首次登場電影：《鋼鐵人2》史嘉蕾喬韓森飾
神盾局的重要滲透探員，為了將鋼鐵人納入復仇者聯盟團隊，而在《鋼鐵人2》中滲透入東尼史塔克企業。黑寡婦有著來無影去無蹤的間諜身手，能夠在極短的時間內給予對手致命打擊。在《美國隊長2》中擔任重要的角色，協助他對抗酷寒戰士，並反擊被九頭蛇滲透的神盾局。
黑豹（帝查拉）首次登場電影：《美國隊長3：英雄內戰》 查德維克博斯曼飾
來自非洲國家瓦坎達的國王（虛構國度，在《復仇者聯盟2》追逐奧創的劇情中有被提及，是個生產汎合金金屬的國家），是個天才科學家，善用汎合金製作成武器，包括他的外衣與爪子，因此能夠刀槍不入，此外具備優秀的獵捕與搏擊能力。
蜘蛛人（彼得帕克）首次在漫威宇宙登場電影：《美國隊長3：英雄內戰》湯姆荷蘭飾
過去電影版權一直在索尼影業手裡的蜘蛛人總算回到了漫威影業手中，本次登場將會是蜘蛛人在漫威宇宙的初登板，設定應該與原作相同，是個聰明的高中生，在一次意外中被奧斯朋的實驗蜘蛛咬到，從此獲得了超強的平衡感，蜘蛛的蛛絲與攀爬能力，以及過人的體能力量。
